产品编号 ：KT110700724
产品规格：24 tests
产品规格：24 tests
| 目录号 | 中文名称 | 英文名称 | 规格 |
| KT110700110 | MALBAC® 单细胞全基因组扩增试剂盒 | MALBAC® Single Cell DNA WGA Kit | 10 tests |
| KT110700150 | MALBAC® 单细胞全基因组扩增试剂盒 | MALBAC® Single Cell DNA WGA Kit | 50 tests |
| KT110700724 | MALBAC® 白金微量RNA扩增试剂盒 | MALBAC® Platinum single cell RNA Amplification Kit | 24 tests |
| KT100805624 | ChromLongTM单细胞全基因组扩增试剂盒 | ChromLongTM Single Cell WGA Kit | 24 tests |
MALBAC®白金微量 RNA 扩增试剂盒
【产品编号】
KT110700724
KT110700796
【产品名称】
通用名：MALBAC® 白金微量 RNA 扩增试剂盒
英文名：MALBAC® Platinum Single Cell RNA Amplification Kit
【包装规格】
24 测试/盒，
96 测试/盒
【产品描述】
MALBAC® 白金微量 RNA 扩增试剂盒能在 5-6 小时内，由 1-2000 个细胞或 10 pg-20 ng 经提取的真核生物总
RNA 为起始，特异性针对其中的 mRNA 进行逆转录，并以 MALBAC® Template-switching 专利技术在 cDNA 的
3’端添加一段带有表达定量分子标签的接头序列，通过该接头序列进行后续的 PCR 扩增，获得全长 cDNA 扩
增产物，有效避免了 cDNA 合成过程中的 3’偏好性和基因组 DNA 与 rRNA 的污染，同时表达定量分子标签可
辅助基因表达量计算，在完整扩增 mRNA 序列信息的同时保留链来源信息，对基因表达进行精确定量。一
般情况下，一个反应视投入量可以扩增出 2-50 ng 高质量全长双链 cDNA。
本试剂盒可获得95%以上的逆转录与扩增成功率，全长 cDNA扩增产物可无缝衔接主流测序平台，如Illumina、
Ion torrent、PGM、Ion Proton 测序仪，下机数据（2.5M Reads）可检测到 90%以上的基因表达，基因表达一
致性超过 90%，扩增无明显偏倚，且需要的样本投入量更少。
【预期用途】
本产品主要用于单细胞 RNA-Seq 前的样本扩增。单细胞 RNA-Seq 是指通过对单个细胞的 mRNA 进行逆转录
和 PCR 扩增，使用高通量测序手段，对单细胞中 mRNA 进行基因表达定量、功能富集、代谢通路等分析。
本产品可以解决传统 RNA 逆转录与扩增技术在早期胚胎发育、干细胞、癌症、免疫等研究领域中存在的样
品量极低或细胞异质性的问题，是在单细胞水平研究基因表达强有力的工具，极大地拓展了 RNA-Seq 的应
用范围：
⚫ 极微量样品的表达分析（单个细胞）
⚫ 胚胎早期发育研究
⚫ 肿瘤细胞异质性研究
⚫ 免疫细胞群研究
⚫ 干细胞分化研究
【适用领域】
本试剂盒可解决传统 RNA 逆转录与扩增技术在早期胚胎发育、干细胞、癌症、免疫等研究领域中存在的样
品量极低或细胞异质性的问题。
【样本要求】
1. 样本起始量
本试剂盒是针对单细胞或极微量细胞的转录组扩增设计的，使用 Oligo dT Primer 扩增带 polyA 序列的 RNA。
兼容多种样品类型：1-2000 个哺乳动物细胞，或其他无细胞壁结构的真核细胞；10 pg-20 ng 纯化后的总 RNA
（注意，如以微量 RNA 为起始，强烈建议在试剂盒中无 RNA 酶水中 49：1 掺入 RNase Inhibitor，配置成 Mix，
作为 RNA 稀释 Buffer）；不适用于原核细胞；不适用于固定后的细胞。
2. 样本收集方式
FACS 分选、激光捕获显微切割（LCM）、针吸活检、微流体技术方式获得的单细胞均可利用本试剂盒进行转
录组扩增。
3. 样本预处理
由于细胞的基因表达是瞬时变化的，细胞类型、细胞活性及细胞所处周期的不同，都会显著影响最终的 cDNA
产出。请确定细胞的获取方式对细胞活性的影响，我们建议在每次收集完细胞样品后对细胞活性进行鉴定，
死亡的细胞会发生明显的 RNA 降解并导致反应失败。鉴定合格后建议立即进行反应，不适当的保存条件会
导致细胞中的 RNA 降解。为避免细胞准备过程中外源 RNA 的污染，建议在实验前对细胞进行清洗，清洗液
为不含 Mg2+和 Ca2+的无菌 1×PBS 溶液。
【实验准备】
1. 预扩增样本准备区的隔离
为避免样本受外界因素干扰或 RNA 酶的污染，在实验前，细胞样本的准备过程需在单独隔离的实验室或专
门工作区完成，并预备专用的实验材料和仪器，例如，移液器、移液管、PCR 管、1.5 mL 的离心管、离心管
架、离心机、漩涡混和仪和实验服等；
请将扩增产物与试剂盒中其他试剂分开储存。所有的下游分析处理，如 DNA 纯化、测序前的准备工作，请
在另一实验室进行。
2. 对照组 DNA 样本
阳性对照配置：如以细胞为起始，可将同批（处理方式相同）的约 100 个细胞作为阳性对照；如以核酸为
起始，可用同批（处理方式相同）的 1 ng 总 RNA 为阳性对照。
阴性对照配置：取 3.5 μL 无 RNA 酶水，加入到含 1.5μL Cell Lysis Buffer 的 PCR 管中，作为阴性对照。
1. 操作前必须仔细检查所有样品，应排除污染的样品；
2. 操作注意安全防护，穿戴防护衣物、一次性手套、口罩；所有直接接触过样本的物品应进行消毒后丢弃
或再次使用，同时防止操作者脱落细胞的污染；
3. 使用前，试剂应混合均匀，尽量避免反复冻融；
4. 所使用的接触试剂的材料均要求干燥、洁净，以防止污染。操作过程中涉及的耗材如为一次性使用，则
不得重复使用；
5. 实验人员必须进行专业培训，严格按照说明书操作；
6. 本试剂一次性使用，不同批号试剂禁止交叉使用，请勿使用过期试剂；
7. 样本应视为存在潜在的生物危害，实验结束后作为潜在传染源处理；
8. 操作应尽量迅速，减少准备过程中出现核酸污染或混入聚合酶抑制剂；
9. 避免样本因储存方法或准备方法不当造成的 RNA 降解；
10. 请严格按照试剂盒储存条件存放试剂盒各个组分，防止由于储存不当导致的试剂失效或其他不良结果；
11. 本试剂盒仅供科研使用，不用于临床诊断和其他用途；
12. 本试剂盒必须严格按照说明书进行操作，由于不按
