产品编号：KT110700150
产品规格：50 tests
产品规格：50 tests
| 目录号 | 中文名称 | 英文名称 | 规格 |
| KT110700110 | MALBAC® 单细胞全基因组扩增试剂盒 | MALBAC® Single Cell DNA WGA Kit | 10 tests |
| KT110700150 | MALBAC® 单细胞全基因组扩增试剂盒 | MALBAC® Single Cell DNA WGA Kit | 50 tests |
| KT110700724 | MALBAC® 白金微量RNA扩增试剂盒 | MALBAC® Platinum single cell RNA Amplification Kit | 24 tests |
| KT100805624 | ChromLongTM单细胞全基因组扩增试剂盒 | ChromLongTM Single Cell WGA Kit | 24 tests |
MALBAC® 单细胞全基因组扩增试剂盒
【产品名称】
通用名：MALBAC® 单细胞全基因组扩增试剂盒
英文名：MALBAC® Single Cell WGA Kit
【预期用途】
本产品可用于单细胞或其他微量样本中 DNA 提取和全基因组扩增，扩增产物可用于实时定量 PCR、高通量
测序等技术平台，也可用于多种下游实验如：基因点突变分析检测，单核苷酸多态性（SNP）基因分型，基
因拷贝数（CNV）分析，微阵列比较基因组杂交（Array CGH），SNP 芯片技术。
【实验原理】
本产品可实现高度均一的全基因组扩增，其核心技术为多次退火环状循环扩增（MALBAC）技术，该技术利
用独特的具有链置换活性的 DNA 聚合酶进行准线性的全基因组预扩增，再通过 PCR 技术进行指数式扩增，
为下游分析提供充足的实验材料。
【主要组成成分】
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【自备物品】
1. 试剂：无核酸酶水、1×PBS 缓冲液。
2. 仪器：PCR 仪、微量分光光度计、混匀仪、微型离心机。
【储存条件及有效期】
试剂盒于-25～-15℃保存；可以按需求分装保存，避免反复冻融。
有效期为 24 个月。生产日期和失效日期见外包装盒。
【产品特点】
1. 单细胞经扩增后可获得 2～5 μg 的 DNA 产物。
2. 单管操作、3 步完成、仅需 4 小时、中间产物无需纯化。
3. 可从流式分选出的细胞或 0.5 pg 级 DNA 中扩增出全基因组 DNA，且成功率达 95%以上。
4. 可在 AT-GC 富集区得到准确、高重复度的连续扩增结果。
5. 全基因组覆盖度高，仅存在<10%的等位基因丢失。
【适用领域】
MALBAC 单细胞全基因组扩增试剂盒的适用范围十分广泛，多种原始材料和微量样本均可通过该试剂盒进行
全基因组扩增，包括基因组 DNA、新鲜或干燥的血液、新鲜或冷冻的组织、司法痕量物证等材料。本产品
适用的领域有：
1. 人和动物生物学研究：生物标志物研究（CNVs、SNVs）；体外受精胚胎植入前基因筛查和诊断（PGS/PGD）；
转基因动物基因分型；胚胎和干细胞单精子、卵细胞研究，神经元细胞等研究。
2. 肿瘤研究：体细胞遗传变异分析；肿瘤进化和发展；肿瘤干细胞；循环肿瘤细胞(CTCs)。
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3. 微生物研究：宏基因组学研究；微生物基因分型。
【样本要求】
1. 样本起始量：本试剂盒是针对单细胞的全基因组扩增设计的，同时适用于起始模板量为单染色体或范围
在 0.5 pg～1 ng 级的微量基因组 DNA。
2. 样本收集方式：通过流式细胞仪分选，缓冲液稀释，显微操作和激光显微切割等方式获得的单细胞均可
利用本试剂盒进行全基因组扩增。此外，本试剂盒也适用于经过多聚甲醛固定或激光显微切割的微量的
组织细胞样本。
3. 样本清洗：为避免细胞准备过程中外源 DNA 的污染，建议在实验前对细胞进行清洗，清洗液为不含 Mg2+
和 Ca2+的 1×PBS 溶液，需注意，确保后续实验中的 PBS 溶液的体积不超过 2 μL。
【实验准备】
1. 预扩增样本准备区的隔离
为避免样本受外界因素干扰或 DNA 扩增产物的污染，在扩增前，预扩增样本的准备过程需在单独隔离
的实验室或专门工作区完成，并预备专用的实验材料和仪器，例如，移液器、移液管、PCR 管、1.5 mL
的离心管、离心管架、离心机、涡旋混匀仪和实验服等。
请将 DNA 扩增产物与预扩增试剂分开储存；所有的下游分析处理，如 DNA 纯化、测序前的准备工作，
请在另一实验室中进行。
2. 对照组 DNA 样本(5 μL) 配制
阳性对照配制：用无核酸酶水将 DNA 存储液稀释为 30 pg/μL 的 DNA，取 30 pg/μL DNA 溶液 1 μL，加入
含 4 μL Cell Lysis Buffer 的 PCR 管中，作为阳性对照。
阴性对照配制：取 1 μL 无核酸酶水，加入到含 4 μL Cell Lysis Buffer 的 PCR 管中，作为阴性对照。
【使用方法】
使用前注意：
1. 使用前请将细胞裂解酶、预扩增酶和扩增酶置于冰浴中，其他组分请在用前置于冰上解冻。
2. 由于单细胞全基因组扩增实验全程在同一 PCR 管中进行且反应体积较小，因此加液操作时，移液器吸
头不要接触管中液体，避免将单细胞或 DNA 裹挟出反应体系。
3. 移液时，请沿管壁小心添加，勿吹打 PCR 管中液体。
4. 反应前，请进行短暂离心（微型离心机，2000 转，3-4 秒），确保反应体系中的液体混和均匀。
步骤一：细胞裂解
步骤二：MALBAC 预扩增
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【产品性能指标】
1. 琼脂糖凝胶电泳检测片段长度：取 5 μL 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳（1%琼脂糖凝胶，110V 恒压，25～
35 min），扩增产物大小为 300～2000bp。
2. 纯化产物定量：对扩增产物进行纯化，纯化产物总量为 2～5 μg。
【参考文献】
1. C. Zong, S. Lu, A.R. Chapman, X.S. Xie. Genome-Wide Detection of Single-Nucleotide and Copy Number
Variations of a Single Human Cell. Science, 2012, 338, 1622-1626.
2. Lu S, Zong C, Xie XS, et al. Probing Meiotic Recombination and Aneuploidy of Single Sperm Cells by Whole
Genome Sequencing using MALBAC. Science, 2012, 338(6114):1627-30.
3. Hou Y, Fan W, et al. Genome Analyses of Single Human O℃ytes. Cell, 2013, 155(7):1492-506.(Meiotic
Recombination)
4. Ni X, Zhuo M, Xie XS, et al. Reproducible Copy Number Variation Patterns among Single Circulating Tumor Cells
of Lung Cancer Patients. PNAS, 2013, 110(52):21083-8.
5. Yu Z, Lu S, Huang Y. Microfluidic Whole Genome Amplification Device for Single Cell Sequencing. Anal.Chem.,
2014℃t 7; 86(19):9386-90.
6. Huang J, Yan L, Xie XS, Qiao J, et al. Validation of Multiple Annealing and Looping-Based Amplification Cycle
Sequencing for 24-chromosome Aneuploidy Screening of Cleavage-stage Embryos. Fertil. Steril.,
2014,Dec;102(6):1685-91.
