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MTM100

MTM100免提取支原体检测试剂盒(qPCR法)

产品编号:MTM100
产品包装:100T
  • 免提取支原体检测试剂盒(qPCR法)

    货号:MTM100     

    规格:100T

    保存:-20

    产品简介:

    本产品是一种基于实时荧光PCR方法检测支原体的试剂盒,其原理是针对支原体保守区的16S核糖体基因而设计和开发的高特异性TaqMan探针包括内参 ICDNA IC 特异性 TaqMan 探针(HEX 标记)正是因为这种特性,本产品可以允许检测106支原体物种,而不对与遗传相关的细菌或真核DNA产生交叉反应。实验证明本产品在能够检测荧光染料FAMHEX的任何类型的实时定量PCR仪上通用,可在2小时内完成检测。使用TaqMan探头增加了PCR检测系统的特异性。与传统的PCR检测试剂盒相比,该qPCR试剂盒是一种快速检测,动手时间更少,具有自动化的潜力。

    产品特点:

    灵敏度高,  样品稀释10000倍后还可以检测到信号

    直扩免提取  省去提取DNA的环节,直接用细胞上清液可以扩增

    检测范围广  涵盖主要28中支原体,并可以检测128种支原体

    重现性好    采用化学修饰的HS-Taq聚合酶

    时间短      2小时内完成实验

     试剂组成成分:

    2 × Premix250μL1,000 μL

    阳性对照:20 μL

    PCR 级水:1mL

    收到后请将试剂储存 -20°C

     

      应用:

    免提取支原体检测试剂盒(qPCR法)可检测超过104 种可培养不可培养的支原体物种,包括细胞培养中最常见的(, Acholeplasma. laidlawii, M. arginini, M. fermentans, M. gallisepticum, M. hyorhinis, M. orale, M. salivarium, M. synoviae, and S. citri (1)以及致病性人类支原体物种肺炎支原体和人支原体。

     

     特别声明:本试剂盒的开发、设计和销售仅用于科学研究目的适用于用于人类或动物的疾病诊断使用

     

    实验步骤:

    1. 测试样品制备  测试样品应收集90%-100%培养至少2天的培养物。

     

       B. PCR 设置

    1. 完全解冻Premix 和阳性对照。

       2. 瞬时涡旋混匀并置于掌上离心机上离心20s

       3. 为每个反应添加 10 µL  2 * Premix

       4. 检测样品,加入2µL样品上清液和PCR级水8ul至总体积20 µL

    对于阴性对照,添10µL PCR 级水;

    对于阳性对照,添加 2μL提供的阳性对照和 8μL 水。

    1. 开始反应

    1. 关闭PCR 涡旋混匀PCR 置于PCR仪温控板上并启动程序。

       2. 推荐使用PCR仪程序:

    95下初始变性 5分钟

    然后是 45 个循环,95 20 秒,60 30 秒。

    1. 启动程序和数据读取。

     

    1. 分析结果

    1. 在运行结束时保存数据。

       2. 读取 FAM HEX 通道的荧光值

       3. 按照实时荧光定量PCR仪的标准程序设置阈值。检查每个样品的荧光数据以获得典型的扩增曲线(荧光的对数增加)并手动更正阈值设置。

       4. 读取阴性对照、阳性对照和样品的 Ct 值。

     

       E. 测试评估

    PCR 期间,FAM 通道中荧光信号的增加表明样品中存在支原体污染。

    污染物的浓度可以通过软件将样品的交叉循环数与在同一运行中创建的标准曲线进行比较来计算。

     (HEX) 通道中的荧光信号表明已成功执行PCR反应

     

    FAM 通道

    HEX 通道

       结果解释

    阳性对照 (Ct < 30)

    Ct < 35

    试剂是没问题的

    阳性对照 Ct > 30

    Ct > 35

    试剂本身有问题

    样品无 Ct

    Ct < 35

         视为阴性

    样品的 Ct < 40

    Ct < 35

    视为阳性

    样品无 Ct

    Ct > 35

    考虑PCR反应抑制

    qPCR结果的标注

     

    Figure 1: Amplification plots of a dilution series of cell culture medium with Mycoplasma contamination.

    1. Detection of target amplification in FAM channel;
    2. Monitoring of Internal Control (IC) amplification in HEX channel.

     

    Figure 2 Detection of Mycoplasma contamination in 3 testing samples. A positive control also includes.

    1. Detection of target amplification in FAM channel;
    2. Monitoring of Internal Control (IC) amplification in HEX channel. Sample 1 was contaminated.

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    附录:可检测涵盖的支原体种类106种(常见种类用红色标记)

     

    Acholeplasma granularum

    Mycoplasma citelli

    Mycoplasma indiense

    Mycoplasma synoviae

    Acholeplasma laidlawii

    Mycoplasma cloacale

    Mycoplasma lacerti

    Mycoplasma testudineum

    Acholeplasma pleciae

    Mycoplasma collis

    Mycoplasma lagogenitalium

    Mycoplasma timone

    Mesoplasma florum

    Mycoplasma columborale

    Mycoplasma lipofaciens

    Phytoplasma spp

    Mesoplasma grammopterae

    Mycoplasma conjunctivae

    Mycoplasma microti

    Spiroplasma cantharicola

    Mesoplasma photuris

    Mycoplasma cricetuli

    Mycoplasma moatsii

    Spiroplasma citri

    Mesoplasma syrphidae

    Mycoplasma crocodyli

    Mycoplasma mobile

    Spiroplasma insolitum

    Mesoplasma tabanidae

    Mycoplasma dispar

    Mycoplasma molare

    Spiroplasma kunkelii

    Mycoplasma agalactiae

    Mycoplasma edwardii

    Mycoplasma muris

    Spiroplasma lineolae

    Mycoplasma alkalescens

    Mycoplasma elephantis

    Mycoplasma mustelae

    Spiroplasma melliferum

    Mycoplasma alligatoris

    Mycoplasma equirhinis

    Mycoplasma mycoides

    Spiroplasma mirum

    Mycoplasma alvi

    Mycoplasma falconis

    Mycoplasma neurolyticum

    Spiroplasma phoeniceum

    Mycoplasma ampliforme

    Mycoplasma fastidiosum

    Mycoplasma

    Spiroplasma poulsonii

    Mycoplasma anseris

    Mycoplasma faucium

    opalescens

    Spiroplasma taiwanense

    Mycoplasma arginini

    Mycoplasma felis

    Mycoplasma

    Spiroplasma platyhelix

    Mycoplasma arthritidis

    Mycoplasma fermentans

    orale

    Testudines testudinis

    Mycoplasma auris

    Mycoplasma gallinaceum

    Mycoplasma oxoniensis

    Testudines verecundum

    Mycoplasma bovigenitalium

    Mycoplasma gallisepticum

    Mycoplasma penetrans

    Testudines volis

    Mycoplasma bovirhinis

    Mycoplasma gateae

    Mycoplasma phocicerebrale

    Testudines yeatsii

    Mycoplasma bovis

    Mycoplasma genitalium

    Mycoplasma pirum

    Testudines zalophi

    Mycoplasma buccale

    Mycoplasma gypis

    Mycoplasma pneumoniae

    Ureaplasma cati

    Mycoplasma californicum

    Mycoplasma hominis

    Mycoplasma primatum

    Ureaplasma diversum

    Mycoplasma canadense

    Mycoplasma hyopneumoniae

    Mycoplasma pulmonis

    Ureaplasma felinum

    Mycoplasma canimucosale

    Mycoplasma hyorhinis

    Mycoplasma salivarium

    Ureaplasma gallorale

    Mycoplasma canis

    Mycoplasma hyosynoviae

    Mycoplasma spermatophilum

    Ureaplasma parvurm

    Mycoplasma capricolum

    Mycoplasma imitans

    Mycoplasma spumans

    Ureaplasma urealyticum

    Mycoplasma cavipharyngis

     

    Mycoplasma sualvi

     

     

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