MTM100免提取支原体检测试剂盒（qPCR法）
产品包装：100T
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免提取支原体检测试剂盒（qPCR法）
货号：MTM100
规格：100T
保存：-20℃
产品简介：
本产品是一种基于实时荧光PCR方法检测支原体的试剂盒，其原理是针对支原体保守区的16S核糖体基因而设计和开发的高特异性TaqMan探针，包括内参 （IC） DNA 和IC 特异性 TaqMan 探针（HEX 标记）。正是因为这种特性，本产品可以允许检测106种支原体物种，而不对与遗传相关的细菌或真核DNA产生交叉反应。实验证明本产品在能够检测荧光染料FAM和HEX的任何类型的实时定量PCR仪上通用，可在2小时内完成检测。使用TaqMan探头增加了PCR检测系统的特异性。与传统的PCR检测试剂盒相比，该qPCR试剂盒是一种快速检测，动手时间更少，具有自动化的潜力。
产品特点：
灵敏度高， 样品稀释10000倍后还可以检测到信号
直扩免提取 省去提取DNA的环节，直接用细胞上清液可以扩增
检测范围广 涵盖主要28中支原体，并可以检测128种支原体
重现性好 采用化学修饰的HS-Taq聚合酶
时间短 2小时内完成实验
试剂组成成分：
2 × Premix：250μL或1,000 μL
阳性对照：20 μL
PCR 级水：1mL
收到后请将试剂储存于 -20°C。
应用：
免提取支原体检测试剂盒（qPCR法）可检测超过104 种可培养或不可培养的支原体物种，包括细胞培养中最常见的（如, Acholeplasma. laidlawii, M. arginini, M. fermentans, M. gallisepticum, M. hyorhinis, M. orale, M. salivarium, M. synoviae, and S. citri (表1)以及致病性人类支原体物种肺炎支原体和人支原体。
特别声明：本试剂盒的开发、设计和销售仅用于科学研究目的，不适用于用于人类或动物的疾病诊断使用。
实验步骤：
- 测试样品制备 测试样品应收集90%-100%培养至少2天的培养物。
B. PCR 设置
1. 完全解冻的Premix 和阳性对照。
2. 瞬时涡旋混匀并置于掌上离心机上离心20s
3. 为每个反应添加 10 µL 2 * Premix
4. 检测样品，加入2µL样品上清液和PCR级水8ul至总体积20 µL；
对于阴性对照，添加10µL PCR 级水；
对于阳性对照，添加 2μL提供的阳性对照和 8μL 水。
- 开始反应
1. 关闭PCR 管盖并涡旋混匀，将PCR 管置于PCR仪温控板上并启动程序。
2. 推荐使用PCR仪程序：
95℃下初始变性 5分钟，
然后是 45 个循环，95℃下 20 秒，60℃下 30 秒。
- 启动程序和数据读取。
- 分析结果
1. 在运行结束时保存数据。
2. 读取 FAM 和 HEX 通道的荧光值。
3. 按照实时荧光定量PCR仪的标准程序设置阈值。检查每个样品的荧光数据以获得典型的扩增曲线（荧光的对数增加）并手动更正阈值设置。
4. 读取阴性对照、阳性对照和样品的 Ct 值。
E. 测试评估
在 PCR 期间，FAM 通道中荧光信号的增加表明样品中存在支原体污染。
污染物的浓度可以通过软件将样品的交叉循环数与在同一运行中创建的标准曲线进行比较来计算。
内参 (HEX™) 通道中的荧光信号表明已成功执行PCR反应。
FAM 通道
HEX 通道
结果解释
阳性对照 (Ct < 30)
Ct < 35
试剂是没问题的
阳性对照 Ct > 30
Ct > 35
试剂本身有问题
样品无 Ct值
Ct < 35
视为阴性
样品的 Ct < 40
Ct < 35
视为阳性
样品无 Ct值
Ct > 35
考虑PCR反应抑制
表一 对qPCR结果的标注
Figure 1: Amplification plots of a dilution series of cell culture medium with Mycoplasma contamination.
- Detection of target amplification in FAM channel;
- Monitoring of Internal Control (IC) amplification in HEX channel.
Figure 2： Detection of Mycoplasma contamination in 3 testing samples. A positive control also includes.
- Detection of target amplification in FAM channel;
- Monitoring of Internal Control (IC) amplification in HEX channel. Sample 1 was contaminated.
附录：可检测涵盖的支原体种类106种（常见种类用红色标记）
Acholeplasma granularum
Mycoplasma citelli
Mycoplasma indiense
Mycoplasma synoviae
Acholeplasma laidlawii
Mycoplasma cloacale
Mycoplasma lacerti
Mycoplasma testudineum
Acholeplasma pleciae
Mycoplasma collis
Mycoplasma lagogenitalium
Mycoplasma timone
Mesoplasma florum
Mycoplasma columborale
Mycoplasma lipofaciens
Phytoplasma spp
Mesoplasma grammopterae
Mycoplasma conjunctivae
Mycoplasma microti
Spiroplasma cantharicola
Mesoplasma photuris
Mycoplasma cricetuli
Mycoplasma moatsii
Spiroplasma citri
Mesoplasma syrphidae
Mycoplasma crocodyli
Mycoplasma mobile
Spiroplasma insolitum
Mesoplasma tabanidae
Mycoplasma dispar
Mycoplasma molare
Spiroplasma kunkelii
Mycoplasma agalactiae
Mycoplasma edwardii
Mycoplasma muris
Spiroplasma lineolae
Mycoplasma alkalescens
Mycoplasma elephantis
Mycoplasma mustelae
Spiroplasma melliferum
Mycoplasma alligatoris
Mycoplasma equirhinis
Mycoplasma mycoides
Spiroplasma mirum
Mycoplasma alvi
Mycoplasma falconis
Mycoplasma neurolyticum
Spiroplasma phoeniceum
Mycoplasma ampliforme
Mycoplasma fastidiosum
Mycoplasma
Spiroplasma poulsonii
Mycoplasma anseris
Mycoplasma faucium
opalescens
Spiroplasma taiwanense
Mycoplasma arginini
Mycoplasma felis
Mycoplasma
Spiroplasma platyhelix
Mycoplasma arthritidis
Mycoplasma fermentans
orale
Testudines testudinis
Mycoplasma auris
Mycoplasma gallinaceum
Mycoplasma oxoniensis
Testudines verecundum
Mycoplasma bovigenitalium
Mycoplasma gallisepticum
Mycoplasma penetrans
Testudines volis
Mycoplasma bovirhinis
Mycoplasma gateae
Mycoplasma phocicerebrale
Testudines yeatsii
Mycoplasma bovis
Mycoplasma genitalium
Mycoplasma pirum
Testudines zalophi
Mycoplasma buccale
Mycoplasma gypis
Mycoplasma pneumoniae
Ureaplasma cati
Mycoplasma californicum
Mycoplasma hominis
Mycoplasma primatum
Ureaplasma diversum
Mycoplasma canadense
Mycoplasma hyopneumoniae
Mycoplasma pulmonis
Ureaplasma felinum
Mycoplasma canimucosale
Mycoplasma hyorhinis
Mycoplasma salivarium
Ureaplasma gallorale
Mycoplasma canis
Mycoplasma hyosynoviae
Mycoplasma spermatophilum
Ureaplasma parvurm
Mycoplasma capricolum
Mycoplasma imitans
Mycoplasma spumans
Ureaplasma urealyticum
Mycoplasma cavipharyngis
Mycoplasma sualvi
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