CR1005-C-18免提取支原体检测试剂盒Direct PCR Mycoplasma PCR Detection Kit
产品包装：100T
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细胞培养支原体污染 PCR 检测使用说明书
产品名称：免提取支原体检测试剂盒（Direct PCR Mycoplasma PCR Detection Kit ）
产品货号：CR1005-C-18
产品规格：100T
试剂盒组成：All-in-One Ready-to-Go PCR master mix 2.1ml；阳性对照样本（20ul）。
试剂盒保存：-20℃ 保存。
产品介绍：
本公司研发的免提取支原体 PCR 检测试剂盒是一种灵敏度高、操作简单、快速的支原体检测方法。几乎覆盖所有支原体种类，无需提取 DNA，直接采用细胞培养上清进行 PCR 反应，能在 2 小时内获得可靠的结果。该试剂盒具有如下特点：
- 灵敏：可检出细胞培养上清液中 < 50 cfu/ml 的支原体。
- 广谱：覆盖 50 多种 Mycoplasma 以及 Ureaplasma、Mesoplasma、Spiroplasma、Acholeplasma 和 Phytoplasma。
- 简单：操作时仅需加入 4ul 的细胞培养液于 PCR 反应管。
- 快速：可在 2h 内完成检测任务。
- 直观：通过与内参 DNA 扩增效果的比较，可清晰判断支原体的污染程度。
操作步骤(以20ul体系为例）：
- 样品准备：细胞培养 48 小时后，收集少量（0.2ml）细胞培养上清于 0.5ml 管中
- PCR 加样：取 2ul 细胞上清液于 All-in-One Ready-to-Go PCR 反应管中。取18ul预混mix，混匀后PCR检测。
3、PCR 反应：
95℃ 5 min
95℃ 20 s，62℃ 30 s，72℃ 60 s ，35 cycles
72℃ 10 min
4、PCR 产物电泳：提前准备好 1.5%琼脂糖凝胶，取 5ul PCR 反应液进行电泳分析。
结果分析：
PCR Template
PCR product
Result
细胞培养液
500 bp and 700 bp
支原体污染
700 bp only
无污染
500 bp only
支原体重度污染
No band
PCR 反应失败
阳性对照
500 bp and 700 bp
PCR 试剂正常
阴性对照
700 bp only
正常
500 bp and 700 bp 试剂或者加样过程有污染
实例
M: 250bp DNA ladder marker
1: 人肺动脉内皮细胞（HPAEC）培养基M: 250bp DNA ladder marker2: HPAEC 复苏后的上清液
3: HPAEC 培养 24h 后的上清液
4: 培养 48 小时后的 293TN 细胞上清液
5: 阳性对照
6: 阴性对照
7-12：重复同 1-6
13：杀支原体的药处理后的 HPAEC 细胞上清液
14：人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）培养基
15：HPASMC 培养上清液
16：新买细胞上清液
17：无 PCR 反应（含有抑制因子）
18：阴性对照注意事项：
1、每次检测都应该设有阴性对照，（1）由于有效的 PCR 扩增，阴性对照会有一条700 bp 的内参条带，这样可以保证本试剂盒含有的支原体引物和内参以及自己准备的 Taq DNA 聚合酶，dNTP 等试剂没有问题；（2）只有当阴性对照的结果没有出现 500 bp 左右的支原体特异条带时，别的样品的结果才是可信的。
2、如果 700 bp 条带和 500 bp 的条带都没有出现，在排除 PCR 试剂的问题后（即阴性对照可以正常扩增），说明该样品含有抑制 PCR 扩增的代谢产物
3、如发现细胞被支原体污染，本公司提供细胞专用支原体清除和预防试剂。
生产厂家：深圳市库源生物科技有限公司
联系地址：深圳市宝安区石岩应人石天宝路 19 号百财产业园 A1 栋四楼
联系电话：0755-29125910 传真：0755-29125911
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