化学发光超敏HRP底物试剂盒(飞克级)

 Chemiluminescent Ultra Sensitive HRP Subatrate（femtogram）

产品简介

     本试剂盒通过化学发光法对生物分子进行定性或者定量。原理是，标记有辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase , HRP）的生物分子（如抗体）特异性地与某些载体上（如PVDF/NC膜、酶标板或微球）的生物分子相结合，清洗载体后，加入化学发光工作液，载体上结合的HRP能催化该工作液发出荧光（波长为425nm），可用X光片曝光、CCD扫描，对生物分子进行定性。HRP的含量与荧光强度成线性关系，因此借助化学发光仪等对生物分子进行定量，灵敏度达到飞克级。

产品组成

A液+B液                    

储存条件

2-8℃可保存18个月，室温保存12个月。使用前放置恢复室温后，再行配制使用。

特点

本试剂盒操作简单，A液与B液等体积混合即可；发光迅速，不需要孵育直接发光；发光持久，可持续2-3小时；灵敏度高，达到飞克级（国内首款，并超越了pierces、surmodics等国外品牌）。

使用范围

本试剂盒可检测PVDF/NC膜、酶标板（不透光）或者微球上结合的标记有HRP生物分子，灵敏度达到飞克级，设置标准曲线可以定量。

使用方法

1. 配制前请先将试剂恢复至室温，并摇匀，根据工作需求量，配制新鲜的化学发光工作液。A液与B液按照1:1的比例混合，1小时内使用不影响发光效率。
2. 做蛋白印记时，PVDF/NC膜上结合有HRP标记抗体的那一面朝上，将化学发光工作液均匀滴加在PVDF膜上，使用量为0.15ml/cm²或者根据实验习惯使用，无需孵育，即可用X光片曝光或者CCD扫描。如果曝光过强，影响条带拍照，根据我们的经验可考虑用三蒸水将化学发光工作液稀释3-10倍再行使用。
3. 在孔板中进行分子定量时，加入100ul的化学发光工作液或者根据实验习惯使用。如果荧光强度值达到仪器检测上限，影响线性关系，建议将孔板中的工作液立即倒掉，用洗液将孔板清洗3-5次，然后将工作液稀释3-10倍或者使用低灵敏度的发光液再行检测。
4. 做化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA) 时，根据工作需要加入适量的化学发光工作液。

注意事项

1. 吸取液体时，遵循先吸A液，再吸B液的原则，避免交叉污染。为了避免移液枪接触试剂瓶内壁导致外源污染，建议将试剂倒出，然后吸取需要的量。
2. 化学发光工作液配制过程中请使用洁净的枪头，吸取A液和B液务必更换枪头。工作液配制后1个小时内使用，放置久后会对灵敏度有一定的影响。
3. 该发光液对次氯酸钠等氧化剂、金属离子敏感，在使用过程中避免接触。
4. 本试剂盒为飞克级，高灵敏度非常高。做免疫印记时，建议一抗比例建议在1/5 000-1/10 000，二抗使用稀释比例建议在1/10 000-1/50 000。如若检测蛋白浓度极低，可考虑升高抗体浓度。
5. 做免疫印记时，膜干燥会降低HRP活性。可将PVDF/NC膜浸泡在洗液中，在配好发光工作液后在将膜取出，甩干后放在洁净的保鲜膜上面，加入工作液立即后立即曝光检测。
6. 用酶标板定量时，可在孔板留有适量的洗液。配好发光液后，再将孔板拍干，加入发光工作液后立即读数。
7. 化学发光液工作过程本身是一个化学反应，HRP浓度较高时，发光较强，衰减也快；HRP浓度较低时，发光较弱，衰减慢。所以，在使用本试剂盒定性时，为了更建立准确的线性关系，保证整块孔板数值的一致性，请使用排枪，或者其他自动加液装置。

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