产品编号：CR1005-B-100
产品规格：100T
产品规格：100T
伯克霍尔德菌属检测试剂盒（100T）
Burkholderia Detection qPCR Kit (100T)
| 产品名称 |
| 产品货号 |
| 规格 |
| 储存条件 |
| 有效期 |
| 伯克霍尔德菌属检测试剂盒 |
| CR1005-B-100 |
| 100T |
| -20℃，避光 |
| 12 个月 |
产品简介
伯克霍尔德菌属是伯克氏菌科下的一类具有鞭毛、可游动的革兰氏阴性菌（鼻疽伯克霍尔德菌
无鞭毛），广泛分布在水、土壤、植物和人体中，该属目前已发现 24 个种及上百种亚种，其中最具
代表性的是洋葱伯克霍尔德菌复合菌群。洋葱伯克霍尔德菌群是生物制药行业引起水系统污染、行
程管道生物膜，进而对高水分活度药品造成严重风险的典型代表微生物。它们抗逆性强，能够在寡
营养的条件下如纯水中存活，甚至在 12℃或 48℃条件下仍然能够生长繁殖，对多种抗生素、消毒
剂和抑菌剂具有天然抗性，同时也是条件致病菌，已经被 FDA 明确为不可接受微生物。在细胞培
养方面，伯克霍尔德菌甚至可以寄生在细胞内并在细胞内增殖，这无疑增大了伯克霍尔德菌的检测
难度以及清除难度。
本试剂盒采用 Taqman 荧光探针法，利用特异性引物可以有效鉴定出伯克霍尔德菌属的污染，
特异性强，与人类基因组、大肠杆菌等物种基因组无交叉反应；扩增效率高，最低可检测到 1 个拷
贝的微生物基因组；使用方便，可直接将待测样品加入到预混液即可检测。
| 产品名称 | 规格 | 储存条件 |
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2×qPCR Burk Mix
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1mL | -20℃，避光 |
| 5×Burk Primer Mix | 400μL | -20℃，避光 |
| Burk Positive Control | 200μL | -20℃，避光 |
| ddH2O | 1mL | -20℃，避光 |
使用方法
1. 将以上试剂于室温中充分融化，用移液枪反复吹打混匀后，将其分装到高温高压灭菌后的新的离
心管中，冻存于-20℃环境中。
2. 在超净工作台中，取无菌 qPCR 管于冰中，按照每个反应 20μL 的体积计算，按比例分别加入
4μL 5×Burk Primer Mix、4μL ddH2O（高温高压灭菌处理）、10 μL 2×qPCR Burk Mix，移液枪反复吹
打混匀，每个样品建议准备 3 个重复。另外各准备 3 个样品孔，分别加入 2μL 无菌 ddH2O 和 2μL
Burk Positive Control 作为阴性对照和阳性对照。
3. 取 2 μL 待测样品加入到 PCR 预混液中，盖上管盖，离心机中瞬时离心，放入到 qPCR 定量仪
中。
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预变性
|
95℃ | 5min |
| 变性 | 95℃ | 15s |
| 退火 | 62℃ | 15s |
| 延伸 | 72℃，FAM 收集荧光 | 20s |
| 循环数 | 45 Cycles |
| 阳性对照/Ct | 阴性对照/Ct | 待测样品/Ct | 结果判断 |
| ＜45 | N.A | ＜45 | 有伯克霍尔德菌污染 |
| ＜45 | ＞35＆＜45 | ＞35＆＜45 | 可能是操作引入污染所致 |
| ＜45 | ＞35＆＜45 | ＜35 | 有伯克霍尔德菌污染 |
| ＜45 | ＜35 | ＜45 |
试剂引入了污染，更换试剂重测
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| N.A | N.A | N.A | 试剂保存不当导致失活，或者 PCR mix 没有充分融化完全 |
| N.A | N.A | ＜45 | PCR mix 没有充分融化完全，需要重测 |
| ＜45 | N.A | N.A | 无伯克霍尔德菌活菌污染 |
注意事项
1. 2×qPCR Burk Mix 含有高浓度 Mg2+等组分，低温及反复冻融时易析出，在试剂融化后要颠倒混
匀使其组分充分溶解并澄清后再使用；
2. 由于伯克霍尔德菌在环境中分布广泛，极易使得试剂被污染，建议首次使用前先将试剂分装成小
份储存，以避免试剂全部被污染；
3. 待测样品如果含有对 Taq DNA 聚合酶具有抑制作用的物质，建议用 DNA 提取试剂盒纯化待测样
品后再进行检测；
4. 在加入阳性参照时，建议将其最后加入，以防止气溶胶污染待测样品孔以及阴性对照孔；
5. 本品仅用于科学研究使用，不能用于临床诊断。
