首页 ꄲ 细胞质量控制 ꄲ 五联细菌检测试剂盒 CR1005-XJ-5pp50

ꁆ ꁇ

五联细菌检测试剂盒 CR1005-XJ-5pp50

返回列表

产品详情

产品名称：五联细菌检测试剂盒

货号： CR1005-XJ-5pp50

规格： 50T

存储条件： -20℃，避光

有效期： 一年

仅科研使用 Research Use Only

产品简介

本产品是针对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌开发的五联细菌检测试剂盒，既可单独检测上述五种细菌，也可混合检测上述五种菌，并且不会与其他细菌发生交叉反应，最低检出限可检测出1 copies/反应，配合我司研发的极微量细菌DNA提取试剂盒（货号：CR1005-M-02），可检测＜10 CFU的细菌污染，整个提取及检测过程可在3h之内完成。也可搭配其他细菌DNA提取试剂盒使用，但是无法保证＜10 CFU的最低检出限。

产品特点

检测效率高

整个检测流程（含样本前处理）可在3小时内完成，可同时检测五种目标细菌，相比传统培养法（需数天）大幅缩短检测周期，满足批量快速筛查需求。

特异性强

采用针对五种目标细菌独特基因片段设计的特异性TaqMan探针，仅与对应目标菌结合产生相应的荧光信号，对其他常见细菌无交叉反应。

灵敏度高

最低检测限可达10 CFU/mL，即使样本中目标细菌含量极低，也能精准检出，避免漏检风险，确保检测结果可靠性。

操作简便

试剂盒试剂预混度高，关键组分已优化配比，实验人员只需加入处理后的样本即可进行PCR反应，无需复杂的试剂配制步骤，降低操作误差。

结果可靠

配备阳性质控和阴性对照，可全程监控检测过程的有效性，确保实验结果的准确性和重复性，批内与批间变异系数均小于5%。

组分

2×Bact qPCR Mix（1.3mL），避光，-20℃

大肠杆菌Ecoli Primer Mix（100μL），-20℃

枯草芽孢杆菌Bacillus Primer Mix（ 100μL），-20℃

金黄色葡萄球菌Saure Primer Mix（100μL），-20℃

铜绿假单胞菌Paeru Primer Mix（100μL），-20℃

生孢梭菌Cspor Primer Mix （100μL），-20℃

Positive Contro（200μL），-20℃

RNase-free ddH2O（1 mL）-20℃

使用方法

取出试剂，于冰上融化，*颠倒混匀数次*。(重要)
将PCR管置于冰中，分别加入4 μL 5×Mycoplasma qPrimer Mix 和4 μL无菌水，再分别加入10 μL 2×Mycoplasma qPCR Mix，轻轻吹打混匀（建议每个样品做两个重复，以排除操作误差）。
分别加入待测样品2 μL，阴性对照加入2 μL无菌水，最后再加入2 μL阳性参照（建议先加阴性对照，再加待测样品，最后再加阳性参照）。
盖上盖子，离心机瞬时离心，置于qPCR仪进行扩增反应。

qPCR设置程序：

序号	程序名称	温度	时间
1	预变性	95℃	5min
2	变性	95℃	15s
3	退火	60℃	15s
4	延伸	72℃（采集荧光）	30s
5	循环数	2~4步，40循环

本品含有两种荧光修饰的探针，支原体特异性探针采用FAM荧光染料修饰，内部控制探针采用ROX荧光染料修饰，故在收集荧光探针时应选择FAM和ROX双荧光通道进行信号采集。若所用荧光定量仪为单荧光信号通道，则选择FAM荧光信号通道即可。

结果判定：

FAM通道Ct	ROX通道Ct	结果判定
≤35	＜40	样品存在支原体污染
＞35并＜40	＜40	样品可能存在支原体污染
≥40	≥40	样品中存在抑制剂，酶没有正常工作
＜40	≥40	样品中可能存在抑制剂，或探针降解
≥40	＜40	无支原体污染
≤35	单通道定量仪	样品存在支原体污染
＞35并＜40	单通道定量仪	样品可能存在支原体污染
≥40	单通道定量仪	无支原体污染

注：本试剂在ABI 7500荧光定量仪中，1个拷贝的阳性参照的Ct约在39左右，ROX通道的Ct值约在32左右，不同的定量仪所测出来的数值会有所差别。Ct值越小，代表待测样品中检出的支原体基因组数量越高，若ROX通道的Ct值越大，代表待测物中所含的DNA聚合酶抑制剂含量越高，或者引物探针出现降解，抑或是DNA聚合酶失活，若两种信号通道接近40 Ct时（包括阳性参照），请检查确认是否由于酶及引物没有混匀、或者酶失活及探针降解导致的。

1、混合检测：

1.1 用极微量细菌DNA提取试剂盒提取待测样品中的细菌DNA，用80μL洗脱液反复洗脱4遍后置于冰上；

1.2取出检测试剂盒中的试剂，于冰上融化，颠倒混匀数次。

1.3在超净工作台中将PCR管置于冰中，按照表一的体系配比进行试剂配置（建议每个样品至少做三个重复，以排除操作误差），完成后盖好管盖。

试剂	加入体积
2×Bact qPCR Mix	25μL
大肠杆菌Ecoli Primer Mix	1μL
枯草芽孢杆菌Bacillus Primer Mix	1μL
金黄色葡萄球菌Saure Primer Mix	1μL
铜绿假单胞菌Paeru Primer Mix	1μL
生孢梭菌Cspor Primer Mix	1μL
待测样品	20μL
总体积	50μL

表一待测样品检测体系配置比例

1.4 按照表二的体系配比进行试剂配置（建议先加阴性对照，再加阳性参照，阳性对照要和阴性对照以及待测样品隔出一定距离）。

试剂	加入体积
2×Bact qPCR Mix	25μL
大肠杆菌Ecoli Primer Mix	1μL
枯草芽孢杆菌Bacillus Primer Mix	1μL
金黄色葡萄球菌Saure Primer Mix	1μL
铜绿假单胞菌Paeru Primer Mix	1μL
生孢梭菌Cspor Primer Mix	1μL
Positive Control / ddH2O	2μL
ddH2O	18μL
总体积	50μL

表二阳性对照和阴性对照检测体系配置比例

1.5盖上盖子，离心机瞬时离心，置于qPCR仪进行扩增反应。

1.6 qPCR设置程序：

序号	程序名称	温度	时间
1	预变性	95℃	5min
2	变性	95℃	15s
3	退火	60℃	15s
4	延伸	72℃（采集荧光，FAM信号）	20s
5	循环数	2~4步，45循环

注：部分旧款ABI的qPCR仪软件在荧光收集阶段的时长不得少于30s，在此类仪器上使用时延伸时长应设置30s，其余不变。

2、单独检测：

2.1 用极微量细菌DNA提取试剂盒提取待测样品中的细菌DNA，用80μL洗脱液反复洗脱4遍后置于冰上；

2.2取出检测试剂盒中的试剂，于冰上融化，颠倒混匀数次。

2.3在超净工作台中将PCR管置于冰中，按照表三的体系配比进行试剂配置（建议每个样品至少做三个重复，以排除操作误差），完成后盖好管盖。

试剂	加入体积
2×Bact qPCR Mix	25μL
要检测菌种的Primer Mix	2μL
待测样品	20μL
ddH2O	3μL
总体积	50μL

表三待测样品检测体系配置比例

2.4 按照表二的体系配比进行试剂配置（建议先加阴性对照，再加阳性参照，阳性对照要和阴性对照以及待测样品隔出一定距离）。

试剂	加入体积
2×Bact qPCR Mix	25μL
要检测菌种的Primer Mix	2μL
Positive Control / ddH2O	2μL
ddH2O	21μL
总体积	50μL

表四阳性对照和阴性对照检测体系配置比例

2.5盖上盖子，离心机瞬时离心，置于qPCR仪进行扩增反应。

2.6 qPCR设置程序：

序号	程序名称	温度	时间
1	预变性	95℃	5min
2	变性	95℃	15s
3	退火	60℃	15s
4	延伸	72℃（采集荧光，FAM信号）	20s
5	循环数	2~4步，45循环

注：部分旧款ABI的qPCR仪软件在荧光收集阶段的时长不得少于30s，在此类仪器上使用时延伸时长应设置30s，其余不变。

结果判定：

FAM通道Ct	结果判定
Ct≤45	样品可能有上述五种细菌污染
Ct＞45	样品无污染
重复组中有一个样品孔Ct≤45，其余重复Ct≥40	操作引入了污染，建议清洁环境后加测一次