2D & 3D细胞侵袭载玻片2D & 3D invasion assay slides 货号：CR216-10
产品名称：2D & 3D细胞侵袭载玻片2D & 3D invasion assay slides
货号：CR216-10
规格：独立包装，EO灭菌，一张板有10个单元，三个/盒，独立包装，EO灭菌，一张板有10个单元
存储条件： 室温，避光
有效期： 3年
仅科研使用 Research Use Only
产品简介
传统的Transwell实验无法提供实时的动态图像，且难以模拟真实的3D微环境。我们的细胞侵袭载玻片通过“嵌孔 Concentric Well”双隔室设计，让您在活细胞状态下，直观观察并量化细胞在基质胶中的侵袭行为。无论是肿瘤转移研究还是免疫细胞迁移机制，这都是不可或缺的利器。
本品是一种多功能载玻片，用于在凝胶基质上或内部建立细胞界面。
典型应用包括：
- 共培养实验（co-cultivation）
- 物质传输研究（transport studies）
- 细胞顶-基极性测定（apical-basal cell polarity assays）
- 各类基于水凝胶的细胞实验
核心优势与应用场景
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关键特性 |
核心价值 |
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3D基质兼容性 |
模拟真实ECM：内孔可填充 Matrigel 或 Collagen I，细胞不仅能在表面迁移，更能向深层侵袭，完美复刻体内环境。 |
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双隔室流体设计 |
建立稳定梯度：内孔与外孔流体联通但细胞隔离，通过添加不同浓度的趋化因子（如 10% FBS），形成稳定的化学浓度梯度。 |
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平面化凝胶技术 |
成像无死角：独特的内孔几何结构配合 20μL 最佳体积，确保胶原蛋白凝胶表面绝对平整，无液面弯曲，所有侵袭细胞处于同一焦平面。 |
使用说明
【实验前准备：灭菌与密封】
拆封灭菌：在生物安全柜内，使用75%乙醇喷洒腔室外包装，静置5分钟后拆封。使用前建议辅以紫外照射30分钟。
3D 基质准备与填充（冰上操作）
配制：根据实验需求配制基质胶（如 1.5 mg/mL Collagen I，含或不含 10% FBS）。
加胶：使用预冷枪头，向单元内孔垂直加入 20μL 液态凝胶，吸头需深入孔底中央，避免气泡。
聚合：盖上盖子，置于 37°C 培养箱静置 30 分钟，待凝胶完全固化（表面呈平面）。
细胞接种与侵袭体系建立
接种：向内孔的凝胶平面上加入 25μL 细胞悬液（密度建议 1–5×10⁶ cells/mL）。*需根据具体实验具体调配
加液：向外孔加入 250μL 培养基。
趋化组 (-/+)：外孔加含趋化因子培养基，内孔加无因子培养基。
均匀组 (+/+)：内外孔均加含趋化因子培养基（作为运动性对照）。
阴性组 (-/-)：内外孔均加无因子培养基。
培养：放入 37°C、5% CO₂ 培养箱培养，定期显微镜观察。
结果观察与量化
观察：细胞会在 2-24 小时内开始向凝胶内部侵袭。
量化：
侵袭深度：测量细胞进入凝胶的垂直距离。
迁移距离：测量细胞在凝胶内的水平移动距离。
方向性：对比 (-/+) 组与 (+/+) 组，分析趋化因子对方向的引导作用。
实验整体设计举例概述
每次实验需设置3组样品，每组3个生物学平行，使用共9个单元细胞
e.g.
-/+浓度梯度组：仅外孔加趋化因子（10%胎牛血清FBS）
+/+均匀分布组：内孔、外孔、基质胶均加10%FBS
-/-空白对照组：全程无任何趋化因子
分步操作流程&关键步骤原因解析
Step1：预处理
将单元的储液池加入无菌水/PBS。
关键原因
空孔加液：培养箱孵育过程中减少培养基蒸发，维持渗透压与体系体积稳定，避免实验误差。
Step2：根据实验设置配置不同ECM并加入内孔中
提前准备要求
全程冰上操作，移液器吸头提前4℃预冷；
e.g.
仅配制无血清基质胶（适配-/-、-/+组）、含10%FBS基质胶（适配+/+组）。
高粘度胶原移液硬性规范
吸头预冷至4℃再取用胶原；
采用反向移液法：按至第二档位吸满胶原，打液仅按第一档位；也可选用高粘度专用吸头；
4℃下配制完成后仅可存放5 min，必须尽快铺胶。
铺胶操作
按顺序冰上混匀胶原，每单元内孔垂直对准孔中心加入约20μL基质胶；盖板后培养箱静置30 min待胶聚合。
保证基质胶层厚薄均匀平整，避免胶面倾斜、厚薄不一，后续Z轴扫描成像和细胞计数不受胶层差异干扰。*体积校准：通过标尺纸验证凝胶体积（合适体积时标尺无缩放效应）。*
Step3：细胞制备与接种
e.g.
胶聚合期间常规收集细胞，分两种培养基重悬：
无血清培养基：调整密度至\(3×10^5 cells/mL)（用于-/-、-/+组）
10%FBS培养基：同密度调整（用于+/+组）
显微镜确认基质胶完全聚合，未聚合则延长孵育10~15 min；
每单元外孔加250μL对应培养基
e.g.
-/-加无血清，-/+、+/+加10%FBS培养基；
每孔基质胶表面轻柔滴加25μL细胞悬液，严禁吸头触碰胶面；
培养箱静置24 h，让细胞自发侵袭基质胶。
分组匹配培养基：严格匹配实验分组的有无趋化因子条件，保证浓度梯度、空白对照、均匀梯度的实验逻辑；
确认胶完全聚合：未凝固就加细胞会导致细胞沉入胶底层，无法模拟3D基质定向侵袭过程；
不触碰胶面：防止戳破基质胶结构，破坏3D微环境，干扰细胞迁移行为；
固定侵袭时长：统一作用时间，保证组间结果可对比。
Step4：显微成像采集
24 h后用相差显微镜观察细胞侵袭状态；
每个单元随机选3个胶层平整视野，做Z轴序列扫描；
e.g.
从基质胶顶层开始，以13μm步长向下扫描至孔底；Z轴间隔控制在8~15μm（接近单个细胞直径）；
采用蔡司Axio Observer Z1+40×LD Plan-Neofluar物镜采集图像。
随机选平整视野：规避胶层不平整带来的成像偏差，保证数据客观性；
Z轴步长匹配细胞直径：不漏检、不重复计数，能完整捕获所有侵袭到不同深度的细胞；
高倍专用物镜：适配3D基质微结构，清晰分辨不同Z平面的聚焦细胞，为后续评分提供清晰图像。
Step5：数据分析计算
采用深度评分+侵袭指数Invasion index评价细胞侵袭能力；
计算公式：各深度聚焦细胞数×对应深度求和÷总细胞数；
计数规则：细胞跨多个Z切片时，仅以细胞中心所在平面计数1次；
统计标准：平均值±标准误，n=2次独立实验，每次3个平行复孔。
侵袭指数量化：不只统计细胞数量，同时纳入侵袭深度，更真实反映细胞趋化迁移能力；
单平面计数规则：避免同一细胞重复统计，保证数据准确性；
生物学重复+平行对照：降低实验随机误差，结果具备统计学可信度。
实验核心逻辑总结
通过三组对照设计，区分e.g.「浓度梯度诱导、血清均匀刺激、无趋化因子本底侵袭」三种状态；
低温控胶、精准移液、平整铺胶是3D实验成败核心，直接决定微环境完整性；
Z轴分层成像+侵袭指数计算，实现细胞3D定向侵袭的量化分析，可适配其他细胞、趋化因子的迁移机制研究。
注意事项
1. 培养板操作：未放置单元的空余孔需及时加无菌水或PBS，减少培养基蒸发，防止渗透压升高、体系体积改变引发偏差；全程水平放置培养板，切勿倾斜，避免基质胶铺胶厚薄不均。
2. 胶原基质胶配制与铺胶：全程冰上操作，移液器吸头提前4℃预冷（常温易加速胶原自凝）；高粘度胶原需用反向移液法或高粘度专用吸头（禁止常规移液，避免浓度不均）；配制后4℃环境下仅限存放5min，需立即铺胶（超时易凝固结块）；轻柔吹打混匀避免产生气泡、破坏3D基质结构，铺胶时吸头垂直对准单元内孔中心匀速加样，避免偏加、溅壁；基质胶需静置孵育满30min至完全聚合，未聚合严禁加细胞与培养基（防止细胞沉入胶底）。
3. 细胞处理：细胞重悬培养基需与分组严格匹配，不可混用无血清与含血清培养基（避免破坏趋化梯度）；细胞密度统一，各组保持一致以排除密度干扰；加外孔培养基、滴加细胞悬液时动作轻柔，严禁触碰、戳破基质胶（避免破坏3D结构），细胞悬液需滴加在胶面表层，不可直接冲入胶内（保证细胞定向侵袭起始状态）。
4. 孵育与成像：统一细胞侵袭孵育时长，所有组、平行孔同步起止以保证组间可比；成像前筛选基质胶层平整、无气泡、无缺损的视野，避开倾斜、结块区域；Z轴扫描步长控制在8~15μm（与细胞直径相近，避免漏检或重复计数），从基质胶表层逐层扫描至孔底，确保完整捕获不同侵袭深度的细胞；每组每个单元固定选取3个随机视野，保持取样标准统一。
5. 数据分析：细胞跨多个Z轴切片时，仅以细胞中心所在聚焦平面计数1次，严禁重复统计；侵袭指数严格按统一公式计算，所有样本保持相同逻辑；实验设置独立重复与平行复孔，统计结果以平均值±标准误表示，保证结果可靠。
6. 通用要求：全程超净台无菌操作，所有耗材、试剂提前灭菌（防止污染导致实验报废）；胶原、细胞需规范切换低温与适宜培养温度，避免骤变（防止影响细胞活性与胶原凝胶速率）；所有试剂、血清尽量保持批次一致，减少批次差异带来的偏差。
本产品仅供科研使用！
购买信息
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货号 |
产品规格 |
官网价 |
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CR216-10 |
独立包装，EO灭菌，一张板有10个单元 |
200 CNY |
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3个/盒，独立包装，EO灭菌，一张板有10个单元 |
600 CNY |
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