皮肤类器官芯片 Skin Organoid Chip CR222
产品名称：皮肤类器官芯片 Skin Organoid Chip
货号：CR222
规格：独立包装，EO灭菌，1个芯片+1个小室
存储条件：室温，避光
有效期：3年
仅科研使用 Research Use Only
产品简介
皮肤芯片是一款专为体外皮肤组织构建与功能研究而设计的微流控器官芯片系统，通过上下分区结构与多孔膜界面，模拟皮肤组织中表皮—真皮—血管侧的关键微环境。
芯片支持在膜上方原位构建多层皮肤组织结构，并进行气-液连续灌流培养，为皮肤屏障形成、成熟及功能维持提供稳定、可控的动态培养条件。
相较于传统 Transwell 或静态皮肤模型，该芯片可在同一平台内实现组织构建、动态培养、屏障评估与功能检测，更接近真实人体皮肤的生理状态。
使用说明
【实验前准备】
拆封灭菌：在生物安全柜内，使用75%乙醇喷洒腔室外包装，静置5分钟后拆封。使用前建议辅以紫外照射30分钟。
以使用胶原蛋白包埋细胞为例
图1 皮肤芯片细胞接种时间轴
1）Day1，将鼠尾胶原蛋白I型，无菌10x DMEM，无菌1M NaOH，无菌dH2O放置在冰上，配制含有人真皮成纤维细胞的胶原，加入人真皮成纤维细胞后需尽快加入到芯片中。最终细胞浓度为1.8x10^5个/mL，鼠尾胶原蛋白I型的终浓度6 mg/mL。
2）取100μL人真皮成纤维细胞胶原混合物加到芯片培养室中，37℃固化凝胶30 min。随后在芯片各腔室和通道加满10%FBS DMEM，培养7天（中间换液1次）。
3）Day7，配制人表皮角质形成细胞分化培养液。
表1 人表皮角质形成细胞分化培养液配方
|
组分 |
最终浓度 |
EpidermalizationⅠ |
Eidermalization Ⅱ |
Eidermalization Ⅲ |
|
无钙DMEM |
|
363 |
363 |
237 |
|
Ham’s F12 |
|
120 |
120 |
237 |
|
L-谷氨酰胺 |
4 mM |
10 |
10 |
10 |
|
氢化可的松 |
1 μM |
1 |
1 |
1 |
|
腺嘌呤 |
40 μM |
1 |
1 |
1 |
|
三碘甲状腺原氨酸（T3） |
20 nM |
1 |
1 |
1 |
|
转铁蛋白 |
10 μg/ml |
1 |
1 |
1 |
|
胰岛素 |
10 μg/ml |
1 |
1 |
1 |
|
孕酮 |
2 nM |
0.5 |
0.5 |
0 |
|
氯化钙 |
1.8 mM |
0 |
1.8 |
1.8 |
|
FBS |
|
0.5 |
0.5 |
10 |
|
表皮生长因子（原液浓0.1mg/ml） |
5 ng/ml |
0.025 |
0 |
0 |
4）人表皮角质形成细胞分化培养液配制好后，先将芯片中的10%FBS DMEM吸走，下层加入EpidermalizationⅠ，上层不加。
5）往凝胶表面加入人表皮角质形成细胞悬浮液，细胞终浓度为1500个/mm2，静置10 min后，放入培养箱，37℃孵育1 h。
6）往培养室中缓慢加入EpidermalizationⅠ至满，培养3天。
7）Day 10时将芯片中的EpidermalizationⅠ吸走，加满EidermalizationⅡ，培养2天。
8）Day 12时将芯片中的EidermalizationⅡ吸走，在下层加入EidermalizationⅢ，进行ALI培养，并开始流动，共7天，流速为1μL/min。
9）Day19，人表皮角质形成细胞分化完成。
注：如需测量TEER值或检测屏障通透率，可使用垫圈阻断上层通道后再进行上述操作。
图2 皮肤芯片细胞接种流程示意图
以使用纤维蛋白包埋细胞为例
1）以制备100μL的真皮基质为例，将浓度为40mg/mL的人血浆纤维蛋白原与浓度为10mg/mL的琥珀酰亚胺基戊二酸酯修饰的4臂聚乙二醇（PEG）按照4∶1的比例混合，并在37℃下孵育30-40分钟，将15.6μL的PEG-纤维蛋白原溶液与25μL含有2×104-3×104个细胞的成纤维细胞悬液混合，并用Opti-MEM将总体积调整至50μL；使用浓度为40mM无菌CaCl2溶液将浓度为100U/mL的凝血酶稀释至25U/mL，使用等体积的人凝血酶与PEG-纤维蛋白原-细胞混合物进行混合，混匀后加入到小室的多孔膜上方中并在37℃下孵育30分钟，以促进凝胶形成。
2）凝胶形成后，采用无血清培养基SFM-A进行上下灌流培养，灌流流速设置为1.0μL/min。
3）培养至第4天时，将4×105-5×10^5个/cm2个人表皮角质形成细胞接种到到凝胶上，并静置孵育1h，以促进细胞贴附在凝胶表面。
4）细胞贴壁完成后，采用无血清培养基SFM-B对共培养体系进行上下灌流，灌流流速为1.0μL/min。
5）共培养2天后，停止上层通道培养基部分的灌流，搭建气液界面培养体系，以1μL/min的流速向上层通道通入空气，空气进入芯片前采用孔径0.2μm的无菌针式过滤器进行过滤处理。、
6）芯片下腔采用无血清培养基SFM-C（以1.0μL/min流速持续灌流，培养时长两周，诱导皮肤组织细胞分化、分层及角质化形成。
表2 SFM-A培养基配分
|
组分 |
加入体积 |
终浓度 |
|
Opti-MEM |
475 mL |
|
|
牛血清白蛋白 |
6.67 mL |
0.1% |
|
L - 抗坏血酸 |
2.5 mL |
50 μg/mL |
|
氢化可的松 |
5mL |
0.5 μg/mL |
|
硒（Selenium） |
|
10 μg/mL |
|
胰岛素（Insulin） |
|
5.5 μg/mL |
|
转铁蛋白（Transferrin） |
|
5 μg/mL |
|
乙醇胺（Ethanolamine） |
|
2 μg/mL |
|
牛抑肽酶 |
1.6 mL |
200 KIU/mL |
|
青霉素 / 链霉素 |
5 mL |
1% |
表3 SFM-B 培养基配分
|
组分 |
加入体积 |
终浓度 |
|
角质形成细胞无血清培养基 |
473 mL |
|
|
牛血清白蛋白 |
6.67 mL |
0.1% |
|
L - 抗坏血酸 |
2.5 mL |
50 μg/mL |
|
氢化可的松 |
5mL |
0.5 μg/mL |
|
硒（Selenium） |
|
10 μg/mL |
|
胰岛素（Insulin） |
|
5.5 μg/mL |
|
转铁蛋白（Transferrin） |
|
5 μg/mL |
|
乙醇胺（Ethanolamine） |
|
2 μg/mL |
|
氯化钙 |
600 μL |
1.2 mmol/L |
|
表皮生长因子 |
100 μL |
0.2 ng/mL |
|
牛抑肽酶 |
1.6 mL |
200 KIU/mL |
|
青霉素 / 链霉素 |
5 mL |
1% |
SFM-C培养基配分
|
组分 |
加入体积 |
终浓度 |
|
角质形成细胞无血清培养基 |
473 mL |
|
|
牛血清白蛋白 |
6.67 mL |
0.1% |
|
L - 抗坏血酸 |
2.5 mL |
50 μg/mL |
|
氢化可的松 |
5mL |
0.5 μg/mL |
|
硒（Selenium） |
|
10 μg/mL |
|
胰岛素（Insulin） |
|
5.5 μg/mL |
|
转铁蛋白（Transferrin） |
|
5 μg/mL |
|
乙醇胺（Ethanolamine） |
|
2 μg/mL |
|
亚油酸 |
|
16.8 μmol/L |
|
油酸 |
|
16.8 μmol/L |
|
氯化钙 |
600 μL |
1.2 mmol/L |
|
牛抑肽酶 |
1.6 mL |
200 KIU/mL |
|
青霉素 / 链霉素 |
5 mL |
1% |
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图3 皮肤芯片结构示意图
本产品仅供科研使用！
购买信息
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货号 |
产品规格 |
官网价 |
图片 |
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CR222 |
独立包装，EO灭菌，1个芯片+1个小室 |
549 CNY |
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