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细胞趋化载玻片 CR215-G-2

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产品详情

产品名称:细胞趋化载玻片Chemotaxis Slides

货号:CR215-G-2

规格:独立包装,EO灭菌,一张板有3个单元;3个/盒,独立包装,EO灭菌,一张板有3个单元

存储条件 室温,避光  

有效期: 3年

仅科研使用 Research Use Only

 

产品简介

COOLRUN LIFE SCIENCE® 细胞趋化载玻片是一种用于体外研究细胞定向迁移与趋化行为的专用培养载体,适用于二维/三维下建立稳定、可控的化学因子浓度梯度。

该载玻片通过在上下储液孔中加入不同浓度的刺激因子,依靠分子扩散机制在中央狭窄观察通道内形成持久的浓度差,从而诱导细胞发生定向迁移。整个实验过程中无外加流动、无剪切力干扰,更接近细胞在体内感知浓度梯度的生理状态。其结构高度标准化,适用于多种贴壁或半贴壁细胞(如肿瘤细胞、免疫细胞、内皮细胞等)的趋化实验。

产品与倒置显微镜、活细胞成像系统高度兼容,可进行长时间实时动态追踪,是研究细胞迁移、侵袭及微环境响应的重要工具。

 

核心优势与应用场景

 

1. 细胞趋化与定向迁移研究

·趋化因子、生长因子诱导的细胞定向迁移

·浓度差条件下细胞方向性、迁移速度分析

·细胞对外界化学信号感知能力研究

2. 肿瘤细胞迁移与侵袭研究

·肿瘤细胞对浓度差刺激的迁移响应

·肿瘤侵袭潜能与迁移能力比较

·抗肿瘤药物对细胞迁移行为的影响评价

3. 免疫细胞趋化研究

·白细胞、巨噬细胞、中性粒细胞的趋化行为分析

·炎症相关趋化因子作用研究

·免疫调节药物筛选与功能评价

4. 内皮细胞与血管生成相关研究

·内皮细胞对 VEGF 等因子的定向迁移

·血管生成早期迁移阶段研究

·血管生成/抑制相关信号通路分析

 

5. 药物筛选与功能评价

·促迁移或抑制迁移药物筛选

·剂量依赖性的迁移响应分析

·药物对细胞趋化能力的影响评价

6. 活细胞成像与定量分析

·长时间实时成像(4–24 h 甚至更久)

·单细胞迁移轨迹、方向性和速度分析

·可结合 ImageJ软件进行分析

 

使用说明

【实验前准备:灭菌与密封】

拆封灭菌:在生物安全柜内,使用75%乙醇喷洒腔室外包装,静置5分钟后拆封。使用前建议辅以紫外照射30分钟。

基质胶提前准备:第一天matrigel放入4℃冰箱过夜。第二天待matrigel冻融后,4℃离心数分钟。冰上操作。matrigel用预冷枪头混匀,EP管提前预冷,每500ul分装。

两条平行大容积储液池(各 70 µL)通过中央 1 mm 宽×0.4 mm 高狭槽相连;当两池分别加入不同浓度趋化因子时,狭槽内可形成 0–48 h 稳定的线性浓度梯度。

中央狭槽即为观察区,可贴壁培养 2D 细胞,亦可填充基质胶构建 3D 模型。

一张载玻片含 3 组独立腔室,可并行 3 个技术重复或不同处理。

实验前准备

试剂耗材

细胞悬液(建议 1–5×10⁶ cells/mL,无血清培养基配制)

趋化因子(如 10 % FBS、CCL19、fMLP 等),对照用无因子培养基

基质胶(Matrigel、Collagen I 等,3D 实验必需)

无菌 1×PBS、枪头、塞子、15cm培养皿、37 ℃/5 % CO₂ 培养箱

倒置显微镜(最好带自动平台、CO₂ 孵育盒,4×–20× 物镜即可)

载玻片开封与质检

无菌包装内取出,避免触碰观察区;如有灰尘可用无菌 PBS 轻冲

使用方法:

接种细胞

① 将 5 µL 细胞悬液(约 1×10⁵ cells)注入中央狭槽,避免气泡。(塞子塞住C、D、E、F四个孔后,将5 µL 细胞悬液滴在A孔,随后将枪头插入B孔将细胞悬液吸满中央狭槽)

② 室温静置 15 min,待细胞贴壁(不同细胞贴壁能力不同,请更具贴壁能力适量增减时间);随后两侧储液池各加 70 µL 无因子培养基,注意储液池液体更换时动作轻柔,37 ℃ 孵育 2–4 h 使细胞充分贴壁。(两侧储液加液方法为堵住除加液槽侧外所有孔,倾斜载玻片,从低处孔缓慢加液。如加液后发现中央狭槽细胞流动至储液槽,可适当延长贴壁时间)

建立梯度

① 吸除旧液,一侧储液池加入 70 µL 含趋化因子培养基(+),另一侧加入 70 µL 无因子培养基(−);中央狭槽两端液面高度一致,防止对流。

② 立即用配套塞子封闭全部加液孔,避免蒸发与梯度扰动。

成像

将载玻片置于内含有无菌湿纸巾的15cm培养皿中,间隔所需时间在固定位置拍照。

实时成像

将载玻片置于镜载 37 ℃/5 % CO₂ 孵育系统;选取 3–5 视野/腔室,设定时间间隔(推荐 2–5 min),连续拍摄 4–24 h。

对照设置

同批实验须包含“−/−”对照(两侧均无趋化因子),以判定基线随机迁移。

3D 趋化实验步骤(以 1.5 mg/mL Collagen I 为例)

配制胶原-细胞混合液(冰面操作,防凝)

加入细胞悬液,使终浓度 1–3×10⁶ cells/mL,轻轻混匀避免气泡。

填充观察区

① 立即取 5 µL 胶原-细胞混合液注入中央狭槽,注意勿产生气泡。(塞子塞住C、D、E、F四个孔后,将5 µL 胶原-细胞混合液滴在A孔,随后将枪头插入B孔将细胞悬液吸满中央狭槽)

② 将载玻片水平放入 37 ℃ 孵育箱 30–45 min,待胶原完全成胶。

建立梯度与成像

步骤同 2D 实验;注意储液池液体更换时动作轻柔,防止胶体移位。

实验结束与数据处理

细胞轨迹分析

使用 ImageJ 插件“Manual Tracking”导出细胞轨迹。

计算:

– 趋化指数(Chemotaxis Index, CI)= 位移朝向因子 / 总路径长度

– 速度、方向持续性、Rayleigh 检验 p 值等。

判定标准:CI > 0 且 p < 0.05 视为显著定向迁移;−/− 对照 CI 应≈0。

注意事项

常见问题与解决方案

梯度不稳定 → 检查塞子是否漏液、孵育箱湿度是否 > 90 %。

细胞不迁移 → 确认趋化因子活性、细胞状态(> 90 % 存活)、基质胶浓度是否过高。

3D 成像焦点漂移 → 使用自动 z-stack 或降低采集频率,选用 10× 或 20× 长工作距离物镜。

中央通道漏液 → 轻柔加液,或滴入一侧液体在孔上,用吸头轻柔从另一侧吸出从而充满通道。

出现气泡 → 所有试剂提前回温到室温,避免液体中可溶氧析出;环境湿度保持,避免液体蒸发。

 

 

本产品仅供科研使用!

购买信息

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CR215-G-2

独立包装,EO灭菌,一张板有3个单元

300 CNY

3个/盒,独立包装,EO灭菌,一张板有3个单元

900 CNY

 

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